小檗堿又叫黃連素，是廣泛存在于小檗科、毛 莨科、罌粟科、蕓香科和防己科等植物中的季銨型 異喹啉類生物堿。藥理研究發現小檗堿的作用廣 泛，具有抗癌、抗菌、降血糖、調節血脂等多種藥理活性，小檗堿作為明星分子，引起了國 內外學者的廣泛關注。同時，課題組前期研究發現 小檗堿和其他多種中藥活性成分具有影響Ⅳ型膠原 酶活性的作用。雞胚尿囊膜（CAM）模型作為半 整體動物模型，通過觀察給藥后對胚胎和新生血管生 成的影響，已廣泛用于藥物活性和安全性評價。

1 儀器與材料

1.1 儀器

SH-3A 雙顯恒溫加熱磁力攪拌器（北京金紫光科技發展有限公司）；RE-52A 型旋轉蒸發器（上海 亞榮生化儀器廠）；sartorius BS124S 電子天平（德國賽多利斯股份有限公司）；KQ-500DE 型數控超聲 波清洗儀（北京醫療設備二廠）；ZF-I 型三用紫外 分析儀（上海顧村電光儀器廠）；Avance 500 型核磁共振儀；Agilent 1100 Series 高效液相色譜儀；X-5 顯微熔點測定儀（北京泰克儀器有限公司）； TU-1810 紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器 有限責任公司）；電熱恒溫水浴箱-上海精宏DK-600（上海精宏實驗設備有限公司）；酶標儀 spectra Max190（美 國 Molecular Devices 公司）；孵化箱（北京方通孵 化器廠）；CJT 型超凈工作臺（北京昌平長城空氣凈 化工程公司）；320040 型解剖顯微鏡（日本 Olympus 公司）。 

1.2 材料

鹽酸小檗堿（質量分數 95%）、香草酸（質量 分數 98%）、川芎嗪（質量分數 98%）均購自南京 澤朗醫藥科技有限公司；水楊酸（質量分數 99%）、 阿魏酸（質量分數 98%）均購自阿拉丁試劑（上海）有限公司；乙酸酐、吡啶均購自北京試劑有限公司； 鹽酸四環素，I113003，分析純，購自阿拉丁試劑（上 海）有限公司；Ⅳ型膠原酶購自北京拜爾迪生物醫 藥有限公司；二甲基亞砜、石油醚、乙酸乙酯、丙 酮、無水乙醇等化學試劑均為分析純，購自北京化 工廠。

2 方法與結果

2.1 小檗堿系列衍生物的合成

2.1.1 小檗堿–香草酸（CYQ-40）衍生物的合成

將 香草酸（1 g，5.95 mmol）置于 50 mL 圓底燒瓶中， 加入 30 mL 二氯甲烷后，加入 18 mmol 乙酸酐、少 量吡啶，80 ℃回流攪拌 3 h，石油醚–醋酸乙酯 （10∶7）為展開劑，TLC 監測反應原料基本消失， 停止反應，反應液加入 1% HCl 溶液，洗滌 3 次， 去離子水洗至溶液呈中性，無水 Na2SO4 除水，得 到乙酰香草酸中間體
（1）；將中間體 1 加入二氯亞 砜 10 mmol、二氯甲烷 10 mL，70 ℃回流攪拌 2 h， 回收溶劑至干，乙酰香草酸酰氯中間體
（2）；所得 的中間體 2 取 0.62 mmol 與小檗紅堿 0.62 mmol 置 于 50 mL 圓底燒瓶中，加入少量吡啶，室溫攪拌 1 h， 抽濾并以石油醚、乙醋酸乙酯、丙酮、氯仿洗滌沉 淀，得到黃色粉末 CYQ-40，產率 92.15%，mp 139.2～140.2 ℃。1 H-NMR（400 MHz，DMSO-d6） δ：7.89（s，1H），6.19（s，2H，O-CH2-O），7.10 （s，1H），3.21（brs，2H），2.51（brs，2H），10.05 （s，1H），8.29（d，1H，J＝9.0 Hz），8.36（d，1H， J＝9.0 Hz），9.12（s，1H），4.01（s，3H，OCH3）， 7.45（dd，1H，J＝8.5、2.0 Hz），7.94（d，1H，J＝ 8.5 Hz），7.85（d，1H，J＝2.0 Hz），3.93（s，3H， OCH3）； 13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：異喹 啉環：111.1，148.6，151.2，111.3，130.7，26.6， 59.0，143.6，115.3，133.8，115.9，112.2，126.2， 135.8，132.0，151.0，120.7，102.3，56.467，161.7， 芳環：139.0，151.4，113.9，127.0，125.6，123.9， 56.0，170.1，19.6。HR-ESI-MS m/z：514.949 3 [M]＋。

2.1.2 小檗堿–水楊酸（CYQ-44）衍生物的合成

將 水楊酸（1 g，7.25 mmol）置于 50 mL 圓底燒瓶中， 加入 30 mL 二氯甲烷后，加入 22 mmol 乙酸酐、少 量吡啶，80 ℃回流攪拌 3 h，石油醚–醋酸乙酯 （10∶7）為展開劑，TLC 監測反應原料基本消失， 停止反應，反應液加入 1% HCl 溶液，洗滌 3 次， 去離子水洗至溶液呈中性，無水 Na2SO4除水，得到水楊酸中間體（3）；將中間體 3 加入二氯亞砜 10 mmol、 二氯甲烷 10 mL，70 ℃回流攪拌 2 h，回收溶劑至 干，乙酰水揚酸酰氯中間體（4）；所得的中間體 4 取 0.62 mmol 與小檗紅堿 0.62 mmol 置于 50 mL 圓 底燒瓶中，加入少量吡啶，室溫攪拌 1 h，抽濾并以 石油醚、醋酸乙酯、丙酮、氯仿洗滌沉淀，得到淺 黃色粉末 CYQ-44，產率 90.08%，mp 151.1～ 151.9 ℃。1 H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：7.10 （s，1H），6.99（s，1H），3.26（d，2H），1.89（d， 2H），9.66（s，1H），7.15（d，1H），7.24（d，1H），8.88（s，1H），6.19（s，2H，O-CH2-O），4.06（s， 3H，OCH3），8.44（dd，1H），7.57（m，1H），7.85 （m，1H），7.36（dd，1H），2.266（s，3H，COCH3）； 13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：異喹啉環：105.2， 148.6，151.0，108.0，127.0，26.6，56.4，143.6， 120.3，135.3，155.3，111.9，126.2，139.0，130.7， 149.2，120.7，102.3，56.0，162.2，芳環：151.2， 121.8，132.0，125.6，133.8，123.，170.1，19.6。 HR-ESI-MS m/z：485.000 1 [M＋H]＋ 。

3 討論

基于拼合原理，將明星分子小檗堿與其他一些中藥常見的藥效小分子進行拼合，得到新 型小檗堿衍生物 4 個，結構均已通過 1 H-NMR、 13C-NMR 和 HR-MS 確證。活性篩選采用課題組前 期建立的Ⅳ型膠原酶抑制劑的篩選模型，經方法學 考察和陽性化合物驗證，認為該模型具有一定的可 靠性，可以作為一種藥物活性初步篩選的模型方法。 篩選結果表明小檗堿系列衍生物 CYQ-44、CYQ-48 和 CYQ-50 與陽性藥鹽酸四環素相比，對Ⅳ型膠原 酶有明顯的抑制作用，其中 CYQ-48 效果最好，并 呈現出劑量相關性特點。構效關系表明分子內引入 乙酰基和甲氧基，對Ⅳ型膠原酶作用活性可由促進 逆轉為抑制作用，如具有乙酰基的 CYQ-44、兼具乙 酰基和甲氧基的 CYQ-40、48。研究結果表明小檗堿 類衍生物 9-位酚羥基可以與苯甲酸衍生物拼合成新 的化學實體，目前獲得的衍生物數量偏少，但合成路 線簡便可行，希望以后能有更加廣泛的系列化合物問 世，對該類化合物的構效關系研究更加深入、透徹， 以期更高效率地獲得治療效果佳的候選藥物。



 

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