多巴胺( DA) 是人體內一種重要的兒茶酚胺類神經傳遞物質，是體內去甲腎上腺素或腎上腺素生物 合成的前體，對神經中樞、心血管、腎臟及激素分泌系統以及中樞神經系統的精神活動有重要的調節作用。若人體內的多巴胺分泌不足，可能導致神經肌肉失調，甚至引發帕金森氏癥、老年癡呆癥、癲癇癥、心臟病等疾病，因此，體內多巴胺含量可作為臨床上一些疾病的重要診斷依據，對 多巴胺進行簡單、快速、準確的檢測具有十分重要的理論意義和臨床應用價值。

微波爐( 格蘭仕集團) ; Agilent Cary100 紫外可見分光光度計( 美國安捷倫科技公司) ; F － 7000 熒 光光譜儀( 日本日立公司) ; pHS － 3C 型酸度計( 上海雷磁儀器公司) ; HH － S2 數顯恒溫水浴鍋( 金壇 市醫療儀器廠) ; TGL － 20M 型臺式高速冷凍離心機( 上海盧湘儀離心機有限公司) ; Nicolet 5700 型傅 立葉紅外光譜儀( 美國 Thermo 公司) ; JEM － 2100 透射電子顯微鏡( 日本電子株式會社) ; ESCALab250 X-射線光電子能譜儀( 美國 Thermo 公司) ; FLS － 920 光譜儀( 英國愛丁堡儀器公司) ; DHG － 9146A 電 熱恒溫鼓風干燥箱( 上海精宏實驗設備有限公司) 。 鹽酸多巴胺( 純度≥ 99. 0% ，上海畢得醫藥科技有限公司) ，檸檬酸、尿素( 純度≥ 99. 0% ，九鼎 化學( 上海) 科技有限公司) 。其他所用試劑均為分析純，實驗用水為二次蒸餾水。

準確稱取 0. 5 g 檸檬酸和 0. 3 g 尿素于 100 mL 錐形瓶中，加水 10 mL 溶解，置于微波爐中央位置 于高火檔( 700 W) 微波 3 min，得到棕黑色物質，將棕黑色物質冷卻至室溫，加水溶解，然后離心 10 min( 10 000 r/min) ，取上清液用 0. 22 μm 濾膜過濾，再用截留量 500 kD 的透析袋透析 24 h( 每 3 h 換 水一次) ，除去未反應的檸檬酸和尿素，制得純凈的 N-CDs 溶液。加適量水稀釋配制成濃度為 0. 3 mol / L 的 N-CDs 母液( 以碳計) ，儲藏于 4 ℃冰箱中備用。

將硫酸奎寧溶于 0. 1 mol /L H2 SO4 中，制得硫酸奎寧溶液( Φs = 54. 0% ，360 nm) ，以其作標準物， 根據 Φx = Φs × Ix /Is × As /Ax × η2 x /η2 s 計算熒光量子產率。式中，Φ 為熒光量子產率，I 為熒光發射峰 積分面積，A 為激發波長處溶液的吸光度( 為了使再吸收效應最小化，所測溶液的吸光度值均應小于 0. 05) ，η 為溶劑的折射率; s 代表標準物，x 代表待測物。

在系列 5 mL 離心管中依次加入 0. 4 mL N-CDs、0. 4 mL B － Ｒ 緩沖溶液和一定體積的 DA 標準溶液 ( 0. 001 mol /L) 或其他干擾物質，用去離子水定容至 4 mL，充分混勻后，放入 45 ℃ 的恒溫水浴鍋中孵 育 4 h。隨后，將離心管從水浴鍋中取出，冷卻至室溫，于熒光光譜儀( λex = 360 nm，λem = 440 nm) 上 測定體系熒光強度( IF ) ，同時做 DA 試劑空白( IF0 ) 。

N-CDs 在溶液中分散性良好，基本呈規則的球形。為 N-CDs TEM 圖上統計的大約 100 個碳點的粒徑分布圖，由 該 圖 可 知，合 成 的 N-CDs 粒 徑 范 圍 為 0. 5 ～ 5 nm，主要分布在 2. 0 ～ 3. 5 nm 范圍內，平均粒徑為 2. 6 nm。圖 1C 為 N-CDs 的原子力顯微鏡 ( AFM) 圖，由圖中可以看出，制備的 N-CDs 為規則的球形，AB 段的平均高度在 2. 4 nm 左右，與 TEM 的表征結果基本一致。兩種表征均在純水中進行樣品制備，未經過進一步的超聲處理，說明 N-CDs 在 水中具有很好的分散性。N-CDs 熒光發射峰的位置和強度依賴于激發波長。改變激發波長，N-CDs 的熒光發射峰和強度均隨之改變。 隨著激發波長由 320 nm 增加到 410 nm，熒光發射峰逐漸紅移，發射波長由 441 nm 紅移至 519 nm，同 時熒光強度先增大后減小。N-CDs 的這一熒光特性，可能與其表面缺陷及納米粒子粒徑對光的選擇 性有關。根據 N-CDs 的熒光強度變化，后續試驗選擇最佳激發波長為 360 nm。以硫酸奎寧( 54% ， 0. 1 mol /L H2 SO4 ) 為參考物質，測得該 N-CDs 的熒光量子產率約為 5. 79% 。不同溫度對 DA 猝滅 N-CDs 熒光的影響。結果顯示，常溫下 DA 對 N-CDs 的熒光幾乎沒有猝滅作用，隨著溫度的升高，熒光猝滅逐漸增強，當溫度達 45 ℃時，熒光猝滅程度基 本達到最高，繼續升溫，猝滅效率改變很小。因此，實驗選擇在 45 ℃ 下孵育一定時間后進行熒光 測定。不同 pH 值條件下，孵育不同時間后 N-CDs － DA 體系的熒光變化情況。 結果表明，在 pH 7. 0 條件下，隨著時間的增加，N-CDs － DA 體系的熒光強度變化不甚明顯。pH 8. 0 和 pH 9. 0 時，隨著時間的增加，N-CDs － DA 體系的熒光強度快速降低，孵育時間超過 4 h 后，熒光強 度下降趨緩，且兩種 pH 值條件下的熒光強度變化趨勢基本吻合。當 pH 10. 0 或 pH 11. 0 時，隨著時間 的增加，N-CDs － DA 體系的熒光強度先迅速降低( 且 pH 值越大，下降越迅速) ，后又隨著時間的增加 緩慢升高( 且 pH 值越大熒光強度增大趨勢越明顯) ，其原因可能是在強堿性環境中，多巴胺容易發生 聚合反應形成聚多巴胺。因此，實驗選擇在 pH 8. 0，孵育溫度為 45 ℃ 的條件下，孵育 4 h 后測 定 N-CDs － DA 體系的熒光強度。

以檸檬酸為碳源，尿素為氮源，采用微波一步法合成了水溶性好，富含—OH、—COOH 和—NH2 等官能團的氮摻雜碳點，所制備的 N-CDs 對溶液中的 DA 具有良好的選擇性、靈敏性和抗干擾能力， 基于此建立了一種新的、快速檢測 DA 的方法。該方法的檢出限達 0. 08 μmol·L － 1 。應用于實際樣品 尿液中 DA 含量的檢測，其加標回收率為 99. 5% ～ 106% ，ＲSD 為 1. 8% ～ 2. 3% 。該方法靈敏，簡單， 易操作，在實際生物樣品中 DA 含量的檢測方面具有一定的應用前景。



 

免責聲明：文章僅供學習和交流，如涉及作品版權問題需要我方刪除，請聯系我們，我們會在第一時間進行處理。